【关键词】猪鬃草 小鼠 灌胃给药(ig) 腹腔注射(ip) 半数致死量(LD50) 最大耐受量(MTD)
本课题对猪鬃草的水提液和生药进行了小鼠ig及ip给药的急性毒性试验,以期为其临床安全用药提供参考。
1 材料
1.1药物和仪器 猪鬃草购自贵阳市药材市场,由贵阳医学院生药和药用植物教研室赛明兰教授鉴定。
1.2实验动物 昆明种小鼠,清洁级,体重18-22g,雌雄各半。实验前动物按性别分笼适应性饲养1周,实验时选用行为活动、饮食、精神状况正常的小鼠进行,给药前禁食(不禁水)12小时[2]。
2 方法
2.1猪鬃草的加工制备
水提物:将猪鬃草全草冲洗去泥沙,冷水浸泡半小时,置高效中药提取煎煮机分别煎煮3次,合并滤液,旋转蒸发仪浓缩至所需浓度的水提物混悬液,备用。
生粉:将猪鬃草全草冲洗去泥沙,干燥后粉碎机打粉,过100目筛,得生粉,临用时以蒸馏水配成25%(最大浓度)的混悬液。
2.2预实验
2.2.1水提物灌胃给药 取小鼠18只,雌雄各半,随机分为3个剂量组,分别ig给予1800%(最大浓度)、900%、450%的水提物1次,给药容积为40ml·kg-1。药后连续观察3天,见动物一般状态良好,活动自如,进食、饮水、大便正常,未见死亡及中毒表现。本次试验猪鬃草水提物以最大浓度(1800%)、最大容积(40mL·kg-1)给药,未见动物死亡,故不能进行LD50试验,宜选用MTD试验。
2.2.2水提物腹腔注射给药 取小鼠60只,雌雄各半,随机分为10组,分别ip给予不同浓度的水提物1次,给药容积为20ml·kg-1。药后观察3天,小鼠出现死亡,但中毒表现不明显。本次试验获得小鼠ip给药的全不死量(LD0)为23g•kg-1、全死量(LD100)为67g·kg-1,可进行LD50试验。
2.2.3生粉灌胃给药 取小鼠18只,雌雄各半,随机分为高浓度、中浓度、低浓度3组,分别ig给予25%(最大浓度)、12.5%、6.25%的生粉混悬液1次,给药容积为40ml·kg-1。药后连续观察3天,动物一般状态良好,活动自如,进食、饮水、大便正常,未见死亡及中毒表现。
本次实验猪鬃草生粉以25%(最大浓度)、最大容积(40ml·kg-1)给药,未见动物死亡,故不能进行LD50试验,宜选用MTD测定试验。
2.3正式实验
2.3.1水提物灌胃给药MTD测定 取小鼠20只,雌雄各半,分别ig给予1800%(最大浓度)的水提物1次,给药容积为40ml·kg-1。药后观察2周内动物的基本状态、毒性反应和死亡情况。 2.3.2水提物腹腔注射给药LD50测定 按预试验猪鬃草水提物ip给药的LD0(23g·kg-1)和LD100(67g·kg-1)设计,实验设定7个剂量组,公比γ=0.84。取小鼠140只,雌雄各半,随即分成7组,组别为67.00g·kg-1组、56.28g·kg-1组、47.28g·kg-1组、39.71g·kg-1组、33.36g·kg-1组、28.00g·kg-1组、23.00g·kg-1组。小鼠均ip给药1次,给药容积为20ml·kg-1。药后观察2周内动物的基本状态、毒性反应和死亡情况。
2.3.3生粉灌胃给药MTD测定 取小鼠20只,雌雄各半,分别ig给予25%(最大浓度)的生粉混悬液2次(早晚各1次),给药容积为40ml·kg-1每次。药后观察2周内动物的基本状态、毒性反应和死亡情况。
2.4统计学处理 实验数据用Bliss软件进行处理。
3 结果
3.1水提物灌胃给药MTD测定 药后观察2周,动物基本状态良好,未见动物有毒性反应和死亡。本实验表明猪鬃草水提物ig给药的小鼠MTD为720g·kg-1。
3.2水提物腹腔注射给药LD50测定 水提物ip给药的小鼠LD50为38.995g·kg-1,95%的可信限为34.81-43.69 g·kg-1。动物死亡在性别上无明显差异。
3.3生粉灌胃给药MTD测定 药后观察2周,动物基本状态良好,未见动物有毒性反应和死亡。本实验表明猪鬃草生粉ig给药的小鼠MTD为20g·kg-1。
4 讨论
4.1按该药水提物的最大浓度、小鼠灌胃给药的最大容积进行试验,小鼠灌胃给药的MTD为720g·kg-1,该量相当于成人临床口服日用量(1g·kg-1)的720倍。
4.2按该药生粉的最大浓度、小鼠灌胃给药的最大容积进行试验,小鼠灌胃给药的MTD为20g·kg-1,该量相当于成人临床口服日用量(1g·kg-1)的20倍。
4.3猪鬃草水提物腹腔注射给药,动物出现死亡,小鼠腹腔注射给药的LD50为38.995g·kg-1,95%的可信限为34.81-43.69g·kg-1。
5 小结
猪鬃草水提物、猪鬃草生粉口服给药,安全性高。猪鬃草水提物注射给药,具有明显毒性,值得注意。
参 考 文 献
[1]民间药猪鬃草的生药鉴定.中国民族民间医药杂志,2001:238-239.
[2]陈奇.中药药理研究方法[M]. 第2版.北京:人民卫生出版社,2006,1091.