火麻仁油对小鼠皮肤影响综述
火麻仁油对小鼠皮肤影响综述 火麻仁为桑科植物大麻的干燥成熟种子。具有润肠通便，滋养补虚的功效， 常用治疗老年虚性便秘和习惯性便秘。《神农本草经》云其“味甘、平。主补中 益气，肥健不老”。现代药理研究表明，火麻仁可以从多个方面发挥抗衰老的作 用［1-2］。皮肤的衰老是整体衰老的直观反映、是估价机体年龄的第一个指标， 中医学和现代医学均有论述论及皮肤老化和毛发变白与衰老关系最密切，因此研 究药物对皮肤老化指标的影响也是评价该药物抗衰老作用的重要指标之一［3-5］。火麻仁的传统应用的记载，如《太平圣惠方》中就有“神仙服大麻子益驻颜色变 鬓发延年不老方”的记载;《日华子》曰火麻仁:“补虚劳……长肌肉，益毛发，去 皮肤顽痹……”。为进一步深入和更全面的研究和阐明火麻仁的抗衰老作用和机 制，本文采用现代药理学方法研究了火麻仁油对皮肤老化的影响，以探讨火麻仁 的整体抗衰老效应，为开发、利用火麻仁，研制防治老年病和抗衰老相关产品奠 定基础。
1材料 1.1药物 火麻仁药材，经河南中医学院中药资源鉴定教研室陈随清教授鉴定为桑科 植物大麻CannabisstativaL．的干燥成熟种子;七宝美髯丸由佛山德众药业有限公 司生产(国药准字Z44022830，批号04007)。火麻仁油由上述火麻仁生品去皮后冷 榨制得(出油率为21.65%，比重为0.907gmL－1)。
1.2试剂 超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒，批号20050525;脂褐质Lpf试剂盒，批号 20050523，丙二醛(MDA)试剂盒，批号20050523;羟脯氨酸(Hyp)试剂盒(碱水解法)， 批号20050528;考马斯亮蓝试剂盒，批号20050523。上述试剂均购自南京建成生 物工程研究所。天狼星红，批号20040823，上海华硕精细化学品有限公司(Chroma 进口分装);D-半乳糖，批号20030926，上海恒信化学试剂有限公司生产;三聚乙醛、 冰乙酸、甲醛溶液、乙醇等均为市售分析纯。
1.3仪器 JY6001型电子秤(上海精科公司天平仪器厂)，FA200KA型分析天平(上海 精密电子仪器有限公司)，LD4-2型离心机(北京医用离心机厂)，D2kw-C型恒温水浴锅(北京市光明医疗仪器厂)，UV-2201分光光度计，日本岛津公司;RT-MR2100 匀浆机，SwitzerlandKINEMATICAAG公司。1.4动物昆明种小鼠，体重18～22g， 雌雄各半，购自河南省医学实验动物中心(编号2003LA－014.合格证号410115)。
2方法 2.1动物分组及给药 小鼠根据性别和体重，随机分成6组，每组10只，雌雄分笼饲养，分别是: 空白对照组(生理盐水组)、模型对照组(D-半乳糖组)、火麻仁油高、中、低剂量 组(12.0，6.0，3.0mLkg－1)、七宝美髯丸(阳性对照)组(4gkg－1)。空白对照组每 天颈背部sc生理盐水(用量为10mLkg－1)，1h后ig给予空白对照剂(取1mL吐温-80 和0.5gCMC-Na，加生理盐水至100mL用量为20mLkg－1)。其他5组每只小鼠按 10mLkg－1sc1%D-半乳糖水溶液，1h后各给药组小鼠按20mLkg－1ig给与不同剂 量试验药物，连续42d。实验过程中，每5d各鼠称重记录1次，每日观察小鼠的皮 毛色泽、饮食、饮水、大小便、精神活动情况等。末次给药2h后处死小鼠，取标 本，进行各项指标的测定。
2.2皮肤样本的处理 将小鼠处死立即剥皮肤，留取1g待测含水量用;其余迅速用5%硫化钠溶液 脱毛后即用清水冲洗干净。取背部皮肤0.5cm×0.5cm大小，迅速放入10%中性甲 醛液中固定，拟作组织切片进行组织形态学观察;余皮肤取下后迅速冰冻保存， 拟作皮肤组织匀浆及测定皮肤羟脯氨酸之用。各指标所选取材部位相同。
2.3指标测定 2.3.110%皮肤匀浆的制备取脱毛皮肤组织0.5g，经预冷生理盐水漂洗，除 去皮下脂肪和其他结缔组织，滤纸拭干，称重，量筒量取该组织块9倍质量预冷 生理盐水，用匀浆机制成10%组织匀浆(在低温环境中使组织细胞完全破碎，显 微镜下观察内容物全部游离在液相中)。
2.3.2各项指标的测定测皮肤匀浆中Lpf，SOD，MDA，Hyp含量或活力， 均根据测试盒所附方法、步骤测定。
2.3.3皮肤中水分含量的测定采用烘干法按2.3的方法取1g左右皮肤，精密 称取湿重后置烘箱中，于80℃烘干12h，称其干重，计算皮肤含水量。2.3.4皮肤组织病理学形态观察取小鼠脱毛皮肤，固定于10%的甲醛溶液中， 脱水、石蜡包埋、切片。HE染色法染色，于光镜下观察表皮及真皮厚度、毛孔 及毛囊的状态变化。
2.3.5统计学处理数据分析采用SPSS13.0软件包，计量资料数据以x±s表示， 组间比较采用单因素方差分析。P＜0.05有统计学意义。
3结果 3.1对衰老模型小鼠皮肤组织匀浆中SOD，MDA，Lpf的影响与空白对照组 相比，模型组小鼠皮肤匀浆中SOD活力均显著下降(P＜0.01)，MDA、Lpf均显著 升高(P＜0.01)，说明造模成功。火麻仁油高、中剂量组、七宝美髯丸组小鼠皮肤 匀浆中SOD活力增高(P＜0.01或P＜0.05)。火麻仁油高剂量组、七宝美髯丸组的 MDA，Lpf以及中剂量组的MDA含量均显著降低(P＜0.01，或P＜0.05);火麻仁油 低剂量对以上指标影响不明显。见表1。
3.2对衰老模型小鼠皮肤匀浆中Hyp和皮肤含水量的影响与空白对照组相 比，模型组小鼠皮肤匀浆中Hyp、皮肤含水量均显著减少(P＜0.01)。与模型组小 鼠相比，火麻仁油高、中剂量组、七宝美髯丸组小鼠皮肤匀浆中Hyp、皮肤含水 量均显著提高(P＜0.01，或P＜0.05);火麻仁油低剂量对皮肤含水量及Hyp含量的 影响不明显。见表2。
3.3皮肤组织病理学形态观察空白对照组:各鼠取背部相同部位皮肤经HE 染色，光镜下可见小鼠皮肤形态正常，表皮的基底层、棘细胞层、颗粒层及角质 层界限清楚，真皮位于表皮下面，此层内有血管、汗腺、毛囊和皮脂腺等;经特 殊染色后观察可见小鼠皮肤真皮胶原纤维束细长，染呈红色，胞体丰富，排列成 束状，紧密，呈波纹状，弹力纤维略细长，数量丰富，呈波纹或呈钩状，染呈紫 黑色，排列均匀、紧密，缠绕于胶原纤维束中间，于毛囊周围呈环形排列。见图 1。亚急性衰老模型组:经HE染色，光镜下可见皮肤组织生长受到障碍，真皮层明 显变薄，毛囊与皮脂腺数量锐减;经特殊染色后观察可见胶原纤维层减少，排列 疏松，部分弹力纤维明显断裂，排列紊乱，少部分弹力纤维分布于环绕毛囊周围， 呈环形排列，其总数量明显稀少。见图1。火麻仁油高剂量组:可见小鼠皮肤生长 良好，毛囊数较亚急性衰老模型组明显增加;胶原纤维束一般，呈波纹状排列还 紧密，弹力纤维着色深染。散在于真皮区域内和环绕毛囊周围的弹力纤维总数量 较正常小鼠减少。见图1。火麻仁油中剂量组:试验小鼠皮肤真皮厚度略有增加，毛囊数增加不明显;胶原纤维和弹力纤维情况与火麻仁油高剂量组相似。见图1。
火麻仁油低剂量组:真皮厚度、毛囊数未见明显增加;胶原纤维和弹力纤维情况与 火麻仁油高剂量组相似。见图1。七宝美鬓丸组:真皮厚度和毛囊数较亚急性衰老 模型组均有增加;胶原纤维束中度粗细，呈波纹状排列，不甚紧密，弹力纤维着 色浅染，总数量较空白对照组呈减少趋势。见图1。
4讨论 火麻仁是同时具有补益与润下作用的传统中药，本课题组前期采用鹌鹑、 小鼠、家蚕等多种动物模型研究了火麻仁的抗衰老作用［8-10］，表明火麻仁对 实验动物的循环系统、免疫系统、消化系统的功能或作用有显著促进或改善作用， 也表现出显著延长家蚕寿命的作用［11］。研究结果提示火麻仁具有延缓衰老作 用，并可能与其良好的抗氧化和清除自由基活性有关［2，9-10］。根据中医“藏 居于内，形见于外”的论点，说明皮肤衰老与内脏的衰老以及整体衰老具有密切 的相关性，皮肤的衰老指标可以作为说明机体整体衰老特征之一［12］，皮肤的 状态往往作为估价机体年龄的第一个指标［13］。现代研究表明超氧化物歧化酶 (SOD)、丙二醛(MDA)和脂褐素(Lpf)等是直接关切生物体内“氧化”损害与“抗氧 化”的相关指标［14-15］，而它们有可能是引起或延缓诸如皮肤衰老、皮肤褐斑 的关键因素［16-18］。皮肤中羟脯氨酸(Hyp)和水分的含量常常是评价皮肤状态 的重要指标，其中Hyp大量存在于皮肤的胶原蛋白和弹性蛋白中，胶原蛋白和弹 性蛋白都具有一定的防老化和促再生作用，共同维持着皮肤的光滑性、柔顺性和 弹性，因此常用皮肤中Hyp含量来作为皮肤衰老的指标［19］。火麻仁油中不饱 和脂肪酸的含量高达90%以上，具有良好的清除自由基和抗氧化作用［1］，同 时这些必需脂肪酸极易渗入皮肤表层甚至深层，增强表皮细胞的水合和保湿作用， 减少经皮水分损失［20］;其润下通便作用则能及时排出肠道内的诸多毒素，同 样有助于清除体内自由基，而通过排除肠道毒素也有助于防治一些皮肤疾患［21］。
本文观察了火麻仁对亚急性衰老模型小鼠皮肤相关指标的影响，结果表明它能够 提高皮肤内SOD活性、清除过氧化物、改善蛋白质代谢、提高皮肤含水量以及改 善皮肤的形态功能等，有很好的抗衰老作用，本研究丰富了火麻仁油抗衰老的理 论内涵，并为它的实际应用提供了参考依据。