【摘要】 目的 建立脑脉通颗粒中人参皂苷的含量测定方法。方法 采用Hypersil ODS C18色谱柱(200 mm×4.6 mm, 5 μm),流动相为乙腈-水梯度洗脱,流速：1.0 mL/min,检测波长：203 nm。结果 人参皂苷Rg1平均回收率为 100.71%,RSD=2.27%；Re为100.14%,RSD=1.88%；Rb1为100.94%,RSD=1.95%。结论 所建立的方法简便、准确,可作为脑脉通颗粒的质量控制方法。
【关键词】 脑脉通颗粒；人参皂苷Rg1；人参皂苷Re；人参皂苷Rb1；高效液相色谱法
Abstract：Objective To establish RP-HPLC method for determination of Ginsenosides in effective parts of Naomaitong Granules. Methods Using BDS C18 column (200 mm×4.6 mm, 5 μm) of Dalian Elite, the mobile phase was a mixture of Acetonitrile-water gradient elution. The flow rate was 1.0 mL/min, the wavelength was 203 nm. Results The average recovery rate of Ginsenoside Rg1, Re and Rb1 was 100.71%, 100.14% and 100.94%, respectively, and RSD was 2.27%, 1.88% and 1.95%, respectively. Conclusion The method is simple, accurate and can be used to control the quality of Naomaitong Granules.
Key words：Naomaitong Granules；Ginsenoside Rg1；Ginsenoside Re；Ginsenoside Rb1；HPLC
脑脉通颗粒由大黄、人参等中药组成,具有解毒降浊、益气活血的作用,对脑缺血再灌注损伤有明显保护作用[1]。我们用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)对脑脉通颗粒中人参皂苷进行了分离富集,且确定以主要有效成分人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1的含量来控制脑脉通颗粒的内在质量。本实验建立了脑脉通颗粒中人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1含量的测定方法。
1 仪器与试药
LC-2010A高效液相色谱仪(日本岛津),SPD-M10Avp二极管阵列检测器(日本岛津)；BSZZ4S型电子分析天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)。
人参皂苷Rg1(批号703-200221)、人参皂苷Re(批号754-200115)、人参皂苷Rb1 (批号704- 200318)对照品均购自中国药品生物制品检定所；人参等药材购自河南省医药公司,经河南中医学院生药系陈随清教授鉴定为五加科植物人参Panax ginseng C.A.Mey.的干燥根。
2 方法与结果
2.1 色谱条件[2]
色谱柱：Hypersil ODS C18(200 mm×4.6 mm,5 μm,大连依利特)；流动相：乙腈-水梯度洗脱；流速：1.0 mL/min；检测波长：203 nm；柱温：30 ℃。
2.2 溶液的制备
精密称取以五氧化二磷干燥至恒重的人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷Rb1对照品适量,加甲醇制成每1 mL各含0.5 mg的混合溶液,混匀,即得对照品溶液。
取样品细粉0.6 g,精密称定, 置烧杯中,加蒸馏水20 mL使溶解,转移至分液漏斗中,用水饱和的正丁醇提取5次(20、20、15、15、15 mL),合并正丁醇液,用1%NaOH溶液洗涤2次,每次20 mL,弃去碱液,正丁醇层再用正丁醇饱和的水洗涤3次,每次20 mL,正丁醇液水浴上蒸干,残渣加甲醇使溶解并转移至5 mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,用0.45 μm微孔滤膜滤过,作为供试品溶液。
按比例分别称取除人参外其他药材,按制备工艺制得缺人参的阴性样品,照供试品溶液制备方法制备阴性样品溶液。
2.3 空白试验
分别吸取供试品溶液、阴性对照溶液及对照品溶液各10 μL,按上述色谱条件测定。结果表明,脑脉通颗粒中人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1色谱峰分离良好,且阴性样品无干扰。见图1。
2.4 线性关系的考察
分别精密吸取对照品溶液4、8、10、16、20 μL,按上述色谱条件测定。以色谱峰峰面积为纵坐标,对照品进样量为横坐标,绘制标准曲线并进行线性回归,得回归方程为：人参皂苷Rg1：Y=288 957.987X+9 094.243 8,r=0.999 9；人参皂苷Re：
2.5 精密度试验
精密吸取对照品溶液10 μL,重复进样5次,峰面积积分平均值：人参皂苷Rg1为1 592 968.4,RSD=1.01%；人参皂苷Re为1 101 379.6,RSD=1.04%；人参皂苷Rb1为1 262 951.6,RSD= 1.38%。
2.6 稳定性试验
精密吸取供试品溶液10 μL,分别在制备后0、0.5、1、2、4、6、8 h进样,测定,结果峰面积积分平均值为：人参皂苷Rg1为1 794 377.429,RSD=1.13%；人参皂苷Re为753 876,RSD= 1.20%；人参皂苷Rb1为1 751 400.714,RSD=1.89%。表明样品溶液在8 h内稳定。
2.7 重复性试验
分别取同一供试品6份,按“2.3”项下方法制备样品溶液,按上述色谱条件测定,计算含量平均值。人参皂苷Rg1为0.580%, RSD=1.21%；人参皂苷Re为0.271%,RSD=1.03%；人参皂苷Rg1+Re为0.851%,RSD=0.98%；人参皂苷Rb1为0.651%, RSD= 0.91%。
2.8 回收率试验
精密称取人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1对照品适量,加甲醇分别制成1 mL含2.04 mg人参皂苷Rg1、1.18 mg人参皂苷Re、1.82 mg人参皂苷Rb1溶液备用。取已知含量的样品约0.3 g,共6份,精密称定,分别精密加入人参皂苷Rg1对照品溶液1 mL(2.04 mg)、人参皂苷Re对照品溶液1 mL(1.18 mg)、人参皂苷Rb1对照品溶液1 mL(1.82 mg)置烧杯中,按照供试品溶液制备方法制备供试品溶液,甲醇定容至5 mL量瓶中。按上述色谱条件进行测定,计算回收率,结果见表1。表1 加样回收率试验测定结果（略）
2.9 样品含量测定结果
分别精密称取3批样品, 按供试品溶液的制备项下方法制备,按上述色谱条件进行测定,结果见表2。表2 3批样品人参皂苷含量测定(略)
3 讨论
目前,用HPLC法检测人参皂苷类成分的检测器有紫外检测器和蒸发光散射检测器,使用紫外检测器只能用末端吸收(203 nm)进行检测,虽然有干扰,但只要选择好色谱条件,仍能得到满意的结果。
本实验以《中华人民共和国药典》(2005年版)中人参项下的HPLC法为基础,对脑脉通颗粒中3个人参皂苷进行了含量测定,并分别对精密度、稳定性、重现性和回收率进行了考察。结果表明,在本文介绍的供试品制备方法和色谱条件下,人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1峰分离完好,所建立的方法可以作为脑脉通颗粒的质量控制方法。这为该方的质量标准的建立和控制奠定了基础。
【参考文献】
[1] 任小巧,李建生.脑脉通颗粒对老龄大鼠脑缺血/再灌注损伤脑保护作用的研究[J].中国中药杂志,2004,29(1)：661.
[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社,2005.7.