【关键词】 卵巢 ［摘要］ 目的 观察卵巢切除大鼠脑内不同部位酪氨酸激酶A（TrkA）表达的变化。方法 按Singh方法建立大鼠卵巢切除模型（OVX组），免疫细胞化学染色，观察海马CA1区、皮质区、杏仁复合体区、基底前脑Meynert核等部位TrkA阳性细胞表达的变化。结果 对照组大鼠各观察区有大量TrkA表达，与对照组比较，OVX组大脑海马CA1区、大脑皮质区、杏仁复合体区TrkA阳性细胞数明显减少（t=5.90～8.57,P<0.01），Meynert核区无显著性差异（t=1.65，P>0.05）。结论 大鼠体内雌激素下降可致脑内多部位TrkA表达减少，雌激素与生长因子受体系统可能存在相互影响的关系。
［关键词］ 酪氨酸激酶A；雌激素；大鼠，Wistar
［ABSTRACT］ObjectiveTo observe the changes of tyrosine kinase A (TrkA) in different cerebral regions of ovariectomized rats. MethodsAdult healthy female Wistar rats were randomly pided into two groups: model group (OVX group) and control group. The positive expressions of TrkA cells in the hippocammpi CA1, cortex, amygdala, Meynert of the basal forebrain were compared between the two groups.ResultsThe positive TrkA cells were observed in every section of the brain in control group, while in model group，the positive TrkA cells in the hippocammpi CA1, cortex and amygdala were distinctly decreased as compared with the control group （t=5.90-8.57,P<0.01）. No difference was found in the Meynert nucleus between the two groups. Conclusion The low estrogen induces decrease of positive expression of TrkA in various parts in ovariectomized rats brain. A correlation probably exist between estrogen and growthfactorreceptor system.
［KEY WORDS］tyrosine kinase A; estrogen; rats, Wistar
研究结果表明，雌激素受体（ER）系统与神经生长因子（NGF）受体酪氨酸激酶A(TrkA)在同一神经细胞上具有共存现象，二者之间可能存在共同的作用位点［1］。女性体内的雌激素缺乏与轻度认知障碍（MCI）和阿尔茨海默病（AD）密切相关［2］。本实验观察切除双侧卵巢(OVX)大鼠脑内皮质区、海马CA1区、杏仁复合体区、基底前脑Meynert核等部位TrkA阳性细胞表达的变化，旨在探讨雌激素与TrkA的关系。
1 材料和方法
1.1 实验动物与分组
成年健康雌性Wistar大鼠14只，由山东大学实验动物中心提供，5月龄，体质量210～250 g。常规饲养，环境温度22 ℃，随机分为OVX组和对照组，每组大鼠7只。
1.2 模型制作
按SINGH等［3］的方法制备大鼠OVX模型。对照组大鼠除了不切除卵巢以外,其余处理方法同OVX组。
1.3 大鼠脑组织病理观察
术后观察大鼠1个月后以100 g/L水合氯醛麻醉大鼠(300 mg/kg)，暴露心脏，先以生理盐水200 mL经升主动脉冲洗，再以40 g/L多聚甲醛200～300 mL灌注固定，持续30 min后取脑备用。取材范围为前囟后2.0～5.0 mm和前囟后2.0 mm至前囟前0.3 mm。脑组织常规脱水、透明、浸蜡、石蜡包埋，连续冠状切片（片厚5 μm），用于免疫组化观察。
1.4 免疫组化染色
切片经0.01 mol/L PBS溶液漂洗，入TrkA抗体(1∶200,博士德公司)37 ℃孵育1 h，PBS漂洗后入生物素化兔二抗(博士德公司)孵育2 h,再行1期杨学伟，郭宗君，兰克涛，等卵巢切除大鼠不同脑区酪氨酸激酶A表达的变化41漂洗后入ABC复合物(博士德公司)孵育2 h。用硫酸镍铵加强的DAB法呈色,镜下控制时间,蒸馏水终止反应,干燥、脱水透明、封片,光镜观察。用PBS代替一抗作为阴性对照。
1.5 计数和统计学处理
参考PAXINOS等［4］编写的大鼠脑图谱，Olympus光学显微镜(400倍)下分别在海马CA1区、皮质区、杏仁复合体区、基底前脑Meynert核区随机各取5个视野计数TrkA阳性细胞，计算单个视野TrkA阳性细胞数，用±s表示，采用SPSS 10.0统计软件进行t检验。 2 结 果
对照组大鼠各观察区有大量TrkA表达，与对照组比较，OVX组海马CA1区、皮质区、杏仁复合体区TrkA阳性细胞数明显减少（t=5.90～.57,P<0.01），Meynert核区无明显变化（t=1.65,P>0.05）。见表1。
表1 两组大鼠不同脑区TrkA阳性细胞数(略)
3 讨 论
NGF具有维持成年神经系统存活，阻止成年神经元损伤后神经元的死亡以及调节包括突触的可塑性和神经递质传递等功能。NGF对神经元的大多数效应是由TrkA受体介导的，可激活酪氨酸激酶信号传递系统，从而启动细胞活性，产生生物效应［5］。雌激素是由芳香化酶催化雄激素转化而来，它影响其靶组织的生长、分化和功能发挥，对人类及动物学习、记忆、认知功能具有重要的作用［2,6］。雌激素与神经营养因子及其受体相互作用间接地发挥作用［7］。ER的mRNA在基底前脑神经元和皮质、海马、嗅球这些区域的雌激素靶神经元与神经生长因子受体有广泛的共表达，说明雌激素和神经生长因子之间存在相互作用的基础；雌激素和神经生长因子可能共同作用刺激神经元分化、存活和功能维持。本文研究结果显示，在OVX大鼠脑内皮质区、海马CA1区、杏仁复合体区TrkA免疫阳性细胞明显减少，可能是雌激素的下降影响了ER与TrkA共同表达的基因同步序列位点，而这一位点可能是MCI及AD发病的重要内在机制，其详细过程有待深入研究。
［参考文献］
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