[多药耐药相关蛋白在乳腺浸润性导管癌中的表达] 乳腺浸润性导管癌

【摘要】 目的 探讨多药耐药基因产物P糖蛋白(Pgp)、拓扑异构酶(TOPOⅡ)、谷胱甘肽转移酶(GSTπ)、肺耐药蛋白(LRP)在乳腺浸润性导管癌中的表达及其临床意义。方法 应用免疫组化SP法，对80例乳腺浸润性导管癌的主要耐药指标Pgp、TOPOⅡ、GSTπ、LRP进行检测，并分析其与临床病理特征之间的关系。结果 Pgp、TOPOⅡ、GSTπ、LRP在乳腺浸润性导管癌的阳性表达率分别为40%、55%、65%、80%,Pgp、TOPOⅡ、GSTπ、LRP在乳腺浸润性导管癌的表达无相关性。结论 联合检测LRP、GSTπ、TOPOⅡ、LRP对乳癌化疗药物的选择具有指导作用，对预后的判断有参考价值。

【关键词】 乳腺肿瘤 多药耐药相关蛋白质类 免疫组织化学

［ABSTRACT］ObjectiveTo investigate the expressions of Pgp, TOPOⅡ, GSTπ and LRP in infiltrating ductal carcinoma of breast and evaluate their clinical significance. MethodsPgp, TOPOⅡ, GSTπ and LRP were measured in the patients (n=80) by immunohistochemistry using monoclonal antibodies against these proteins. ResultsThe positive rate of Pgp, TOPOⅡ, GSTπ and LRP was 40%, 55%, 65% and 80%, respectively. The interrelationship among their expressions was not found. ConclusionA combined analysis of the expression of Pgp, TOPOⅡ, GSTπ and LRP in breast cancer may contribute to the drug selection for chemotherapy and prediction of the prognosis of the disease.

［KEY WORDS］breast neoplasms； multidrug resistanceassociated proteins； immunohistochemistry

关于乳腺浸润性导管癌的多药耐药已有许多研究，但多药耐药基因产物P糖蛋白(Pgp)、拓扑异构酶(TOPOⅡ)、谷胱甘肽转移酶(GSTπ)、肺耐药蛋白(LRP)4种指标同时研究尚未见报道。本文采用SP免疫组化法对80例乳腺浸润性导管癌Pgp、GSTπ、TOPOⅡ、LRP进行检测，旨在探讨它们与乳癌临床病理的关系，以及它们之间的相关性，为乳癌病人术后选择合理的化疗方案提供参考依据,以提高治疗效果、延长病人的生存期。

1 材料和方法

1.1 材料及其来源

乳腺浸润性导管癌组织标本80例，均取自我院2000年手术治疗并经术后病理证实病人，均为女性,年龄37～73岁,平均52岁。按1984年国际肿瘤标准分为临床Ⅰ期28例,Ⅱ期22例,Ⅲ期30例。淋巴结转移52例，无淋巴结转移28例。

1.2 检测指标及方法

Pgp、TOPOⅡ、GSTπ、LRP检测采用免疫组化染色SP法。试剂盒由北京中山生物技术有限公司提供。严格按说明书操作,用TBS代替一抗作为阴性对照,用已知阳性的结肠癌组织作为阳性对照。显微镜下观察。

1.3 结果判断

以Pgp、TOPOⅡ、GSTπ、LRP染色细胞，细胞膜、细胞浆、细胞核中存在粗细一致的棕黄色颗粒为阳性。光学显微镜（400倍）下随机计数10个视野的阳性细胞数，阳性细胞数≥25%为（+），<25%为（-）。

2 结 果

2.1 免疫组化染色检查

Pgp阳性颗粒分布于胞浆和（或）胞膜；GSTπ阳性颗粒分布于胞浆和（或）胞核；TOPOⅡ阳性颗粒分布于胞核；LRP阳性颗粒分布于胞浆。4种蛋白在乳癌的阳性表达率分别为40%、55%、65%、80%。

2.2 4种蛋白表达与临床病理特征关系

Pgp、GSTπ、LRP在临床Ⅰ+Ⅱ期乳腺浸润性导管癌的阳性表达率低于Ⅲ期，TOPOⅡ在临床Ⅰ+Ⅱ期阳性表达率高于Ⅲ期，差异有显著性(χ2=5.556～9.905,Ｐ<0.05)。Pgp、GSTπ、LRP阳性表达率在有淋巴结转移组高于无淋巴结转移组,而TOPOⅡ阳性表达率在淋巴结转移组低于无淋巴结转移组，差异有显著意义（χ2=6.191～14.066,P<0.05)。见表1。 表1 乳腺浸润性导管癌4种蛋白阳性表达与临床病理特征的关系

2.3 乳腺浸润性导管癌Pgp、TOPOⅡ、GSTπ、LRP表达的相关性Pgp、TOPOⅡ、GSTπ、LRP在乳腺浸润性导管癌中的表达无相关性。

3 讨 论

Pgp是JULIANO等［1］在研究MDR表型的中国仓鼠卵巢细胞（CHO）时发现的，Pgp为ATP依赖性药物泵。本组资料显示，Pgp在乳腺浸润性导管癌的阳性表达率为40%，这与其他临床资料检测到的未治乳腺浸润性导管癌MDRI Pgp表达率在26%～46%之间相符［2］。Pgp在乳腺浸润性导管癌的表达与临床分期、淋巴结转移有关，提示Pgp的过度表达不仅是乳腺浸润性导管癌MDR的重要指标,也可作为评估临床肿瘤转移和预后的指标。 TOPOⅡ是通过催化DNA螺旋局部构型改变,降低ATP与酶结合的能力,通过影响染色体分离、基因重组和转录及DNA损伤与修复发挥作用。本文中TOPOⅡ阳性表达率在临床Ⅰ+Ⅱ期高于Ⅲ期，差异有显著性,提示TOPOⅡ活性的下降是肿瘤耐药的重要机制之一。

GSTπ是一种催化谷胱甘肽和各种亲电子化合物(包括致癌剂和抗癌剂)结合的多功能酶系［4］。非特异性GSTπ的结合作用可协助药物通过Pgp形成的药物排流泵,还可通过酶结合方式将各种有毒性化学药物、致癌、抗癌药物及亲脂性化合物从体内排除。在许多肿瘤细胞中GSTπ的表达异常升高。本研究其阳性表达率高达65%，说明GSTπ是导致肿瘤耐药的重要催化剂,也是导致化疗失效的重要原因之一。检测血浆和乳腺浸润性导管癌组织中的GSTπ,对预后的判断有参考价值。

LRP基因的扩增或蛋白过表达是产生MDR的一个重要机制,检测LRP蛋白表达对于临床制定化疗方案具有指导作用。本组结果显示，LRP阳性表达率达80%,比PHOL等［4］报道的88%略低。表明在乳腺浸润性导管癌组织中由LRP介导的化疗前非Pgp MDR比较普遍。SCHNEIDER等［5］分析52例进展期乳腺浸润性导管癌化疗前后腋淋巴结LRP的表达情况,认为LRP表达与腋淋巴结转移有关;OXIDE等［6］观察了87例乳腺浸润性导管癌根治术后行化疗和放疗病人的LRP与P21蛋白表达,结果显示，两者联合检测可预测乳腺浸润性导管癌复发。本文结果提示，化疗前LRP阳性乳腺浸润性导管癌更易于发生淋巴结转移。表明LRP不仅介导MDR,也可能对化疗后乳腺浸润性导管癌细胞的增殖、转移产生影响。

肿瘤的多药耐药存在着多种机制,联合检测Pgp、TOPOⅡ、GSTπ、LRP在乳腺浸润性导管癌中的表达,对乳腺浸润性导管癌化疗药物的选择及预后的判断都有重要的参考价值。

【参考文献】

［1］JULIANO R L， LING J C, FICER M, et al. A surface glycoprotein modulating drug permeability in Chinese hamster ovary cell mutants［J］. Biochem Biophys Acta, 1976,455：152.

［2］李杰. 乳腺浸润性导管癌多药耐药性及其逆转的基础临床研究［J］. 中国临床肿瘤学：教育专辑, 2002：187193.

［3］罗兵，赵书佑，辛露，等. 喉癌多药耐药基因和多药耐药相关蛋白基因的表达［J］. 青岛大学医学院学报， 2000，36（4）：235237.

［4］POHL G, FILLPITS M, SUCHMEL R, et al. Expression of lung resistance protein(LRP) in primary breast cancer［J］. Anticancer Res, 1999,19:50515059.

［5］SCHNEIDER J, GONZALEZ ROCES S, POLAN M, et al. Expression of LRP and MDR1 in locally advanced breast cancer predict subaxillary node invasion at the time of rescue mastectomy after induction chemotherapy［J］. Breast Cancer Res, 2001,3(3):183190.

［6］OXIDE H, MINEGISHI A, KOBAYASHIS S, et al. Evaluation of p21 and LRP as a factor suggesting breast cancer recurrence［J］. Nippon Gekkai Zasshi, 2000,101(2):242248.