【摘要】目的 建立天苍颗粒的质量标准。方法 采用薄层色谱法对方中当归、白芷、天麻、苍术进行定性鉴别；采用高效液相色谱法对方中的2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷进行含量测定，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水（13﹕87）为流动相，检测波长为320nm。结果 通过薄层色谱可鉴别出方中成分。2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷含量测定线性范围为0.1132～1.132μg；平均回收率为99.60％；RSD值为1.2％。结论 定性鉴别和含量测定方法准确可行，重复性好，可有效地控制天苍颗粒的质量。 【关键词】天苍颗粒 质量标准 2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷 高效液相色谱法
天苍颗粒由制何首乌、当归、白芷等药组成，具有温经散寒，除湿止痛，舒筋壮骨的功能。适用于跌打损伤、筋骨酸痛，各类关节炎、滑膜炎等各类骨病。但其质量标准并不完善，故需要深入研究。本文利用TLC法和HPLC法进行相应的标准研究，从而提高完善天苍颗粒的质量标准。
1 仪器和试药
LC-10ATVP高效液相色谱仪（日本岛津公司），SPD-10AVP紫外检测器（日本岛津公司），KQ-250DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；硅胶G薄层板(青岛海洋化工厂)；2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品（0844-200003），当归对照药材(120927-200411)，白芷对照药材(120945-200707)，天麻对照药材(120944-200006)，天麻素对照品(110807-200205)，苍术对照药材(120970-200403)均购自中国药品生物制品检定所。乙腈为色谱纯，水为纯化水，其他所用试剂均为分析纯。天苍颗粒样品(批号：20101101，20101102，20101103)。
2 薄层鉴别
2.1 当归: 取本品5g，研细，加乙醚50ml，超声处理30分钟，放冷，滤过，滤液挥干，残渣加乙醚1ml使溶解，另取当归对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取缺失当归的阴性样品5g，同供试品溶液的制备方法制成阴性对照液。照薄层色谱法[1]（中国药典2010年版一部附录VI B）试验，吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯（4﹕1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品和对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照无干扰。（见图1）
2.2 天麻: 取本品5g，研细，加70%甲醇50ml，超声处理30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加70%甲醇5ml使溶解，作为供试品溶液。另取天麻对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。再取天麻素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。再取缺失天麻的阴性样品5g，同供试品溶液的制备方法制成阴性对照液。照薄层色谱法[1]（中国药典2010年版一部附录VI B）试验，分别吸取上述供试品溶液和阴性对照溶液10μl，对照药材及对照品溶液各5μl，点样于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-甲醇-水（9：1：0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%磷钼酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品和对照药材色谱相应位置上，有相同颜色斑点，阴性对照无干扰。（见图2）
3 含量测定
3.1 色谱条件：色谱柱Agilent ODS Cl8(5m，150 mm×4.6mm)；以乙腈-水（13﹕87）为流动相，检测波长为320nm，柱温35℃，流速1.0ml/min，理论塔板数按2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷峰计算应不低于3000。
3.2 样品的制备
3.2.1 对照品溶液的制备：取2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品适量，精密称定，置棕色瓶中加稀乙醇制成每1ml含25μg的溶液，即得。
3.2.2 供试品溶液的制备：取装量差异下的本品内容物，混匀，取适量，研细，取约1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，称重，超声处理（功率250W，频率30KHz）30分钟，取出，放冷，再称定重量,用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，滤液经微孔滤膜（0.45μm）滤过，虑液置棕色瓶中备用。
3.2.3 阴性对照溶液的制备取处方除何首乌的全部药味，按成品工艺及供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。 3.3 系统适用性实验
3.3.1 专属性实验：分别精密吸取上述对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各20μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件检测，在待测成分保留时间处，阴性对照无其他成分干扰，结果表明，测定方法专属性强，无干扰，结果见图4。
3.3.2 线性关系考察：分别精密吸取对照品1、2、4、6、8、10μL溶液， 注入液相色谱仪中，测定色谱峰面积。以进样量为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，经线性回归，回归方程为：Y=1248068X-5646.25，r=0.9998。2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷进样量在0.1132～1.132μg范围内，呈良好的线性关系。
3.3.3 精密度试验：精密吸取对照品溶液，重复进样，连续测定6次，记录峰面积，RSD值2.13％，表明精密度良好，符合含量测定要求。
3.3.4 稳定性试验：取同一份供试品溶液，分别在制备后0，2，6，12，24 h后依法测定连翘苷的峰面积，结果2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷峰面积RSD为0.73％ ，表明供试品溶液在24h内基本稳定。
3.3.5 重复性试验：取同批样品，依法平行制备6份，分别测定2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量，RSD值为1.03％，结果表明供试品制备方法重复性良好，符合含量测定要求。
3.3.6 回收率试验：取已知含量的样品6份，每份约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中再分别加入2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品适量，按供试品溶液的制备项下操作，结果见表1。
表1 回收率试验测定结果
3.3.7 样品测定：分别精密吸取供试品溶液与对照液各10μl，注入液相色谱仪中，测定，即得。结果见表2
表2 三批样品含量测定结果
4 讨论
4.1 2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷为何首乌的主要有效成分，参考有关文献 ，经研究对比，建立了2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量测定法，经方法学验证，本法重现性好、阴性对照无干扰，操作简单，便于满足工业化生产的需要，可有效控制本品的质量，为保证用药的有效性提供技术支持。
4.2 色谱条件的选择依据本文先后考察了甲醇-水、乙腈-甲醇-水，参照相关文献[2-4]最后采用乙腈-水(13﹕87)作为流动相测定连翘苷的含量，检测波长为320nm，流速为1ml／min。理论塔板数不低于3000，主峰与其他杂质峰分离度大于1.5，符合要求。
参 考 文 献
[1]国家药典委员会．中华人民共和国药典(一部)[s]．北京：中国医药科技出版社，2010．
[2]陈彦清，张辉等.高效液相色普法测定润燥通便合剂中二苯乙烯苷含量[J].中国健康月刊，2011，30（4）:391
[3]谢国芳，高敏，张利等. HPLC测定定益脑宁片中二苯乙烯苷的含量[J].现代中医药，2010，30（4）:86-87
[4]廖海民，胡正海，贺定翔．制首乌中二苯乙烯苷含量的HPLC测定[J]．西北药学杂志，2006，21(1)：3—4．