1材料与方法
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1.1试验材料
以病株上分离的黄瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.cucumerinum)为拮抗对象,土壤中分离的木霉菌株为拮抗菌。
1.2试验方法
1.2.1竞争作用。采用对峙培养法[3],在直径为9cm的PDA平板一侧接种直径为5mm的病原真菌菌丝块,在平板另一侧接种拮抗菌,28℃共培养,观察两菌的生长情况。
1.2.2重寄生作用。在PDA培养基中央放置1块20mm×20 mm无菌盖玻片,在左侧距盖玻片40mm处接种木霉,右侧距盖玻片20mm处接种黄瓜枯萎病菌,28℃恒温培养。取下盖玻片,于显微镜下观察菌丝体的作用方式。
1.2.3抗生作用。在装有100mL PDB的三角瓶中接入直径5mm的木霉菌块,28℃、150rpm培养6d,取滤液离心后过0.22μm细菌滤器。在90mL、45℃的PDA中加入10mL上述滤液,摇匀倒成平板,接种直径为5mm的黄瓜枯萎病菌菌块。28℃恒温培养,观察生长情况。
1.2.4溶菌作用。将培养4d的木霉发酵液8 000rpm离心10min。取15mL上清液倒入培养皿中,接入黄瓜枯萎病菌菌块。浅层培养5d后观察生长情况。以高温灭菌的木霉上清液中培养的病菌菌块为对照。
1.2.5盆栽试验。将黄瓜种子经70%乙醇消毒1min,2% NaClO消毒5min,55℃温水浸15~20min,25℃浸泡2~3h,无菌水冲洗3次,25~30℃下催芽1~2d。将黄瓜枯萎病菌接种到麸皮∶玉米粉为3∶1的培养基中,28℃恒温箱中培养至长满整个三角瓶。将催芽基本一致的黄瓜苗在木霉菌悬液(约1×108cfu/mL)中浸1h,取出于灭菌滤纸片上干燥1h后,播种于拌有黄瓜枯萎病菌制剂的土壤中。以无菌水浸种处理为对照。 2结果与分析
2.1竞争作用
平皿对峙试验显示,木霉生长迅速,可快速占据空间,有很强的生长竞争优势,能有效抑制黄瓜枯萎病菌的生长。
2.2重寄生作用
显微镜下观察到木霉菌丝体缠绕着黄瓜枯萎菌丝生长,并在病菌菌丝上产生大量分枝,产生寄生作用。
2.3抗生作用
在PDA培养基中加入10%的木霉发酵液后,黄瓜枯萎病菌菌丝生长不旺盛,与对照有显著的差异。
2.4溶菌作用
在未灭菌的木霉上清液中培养的黄瓜枯萎菌块,仅有细小菌丝的生长,数量较少;而在灭菌后的上清液中,黄瓜枯萎菌生长旺盛,形成大块菌丝团。
2.5盆栽防效试验
盆栽试验结果表明,与对照相比,木霉浸种处理的黄瓜幼苗死亡率为25.0%,显著低于对照的66.7%。
3结论与讨论
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作为安全而环境友好的生防因子,木霉在田间的施用可有效地防治作物病害,从而避免大量使用农药导致病原菌抗药性的产生、作物农药含量超标及环境污染等问题[4-6]。因此,对木霉生防机制深入而全面的研究,将对绿色农业的可持续发展产生重要的推动作用。
4参考文献
[1] 辛雅芬,商金杰,高克详.拮抗木霉菌的生防机制研究进展[J].东北林业大学学报,2005,33(4):88-91.
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[3] 蒲金基,曾会才.绿色木霉LTR12-1对黄瓜枯萎病菌防治作用机制的初步研究[J].热带农业科学,2002,22(4):22-25.
[4] 吕天晓,徐凤花,李世贵,等.生防木霉菌原生质体的制备及再生研究[J].生物技术通报,2009(4):130-134.
[5] 庄敬华,陈捷,杨长成,等.生防木霉菌生物安全性评价[J].中国农业科学,2006,39(4):715-720.
[6] 王勇,王万立,刘春艳,等.生防木霉菌Tr9701的鉴定及其生物学特性[J].华北农学报,2006,21(1):100-104.