剖析大蒜素可以抑制胃癌细胞的生长论文
剖析大蒜素可以抑制胃癌细胞的生长论文 【摘要】目的研究大蒜素对胃癌BGC823细胞增殖的影响。方法通过细胞 培养技术、瑞氏染色、MTT实验方法，观察大蒜素对胃癌细胞生长的影响。结果 BGC823细胞在大蒜素的作用48h后，出现体积变小、核固缩等形态学改变。大蒜 素对胃癌细胞的生长曲线有明显的抑制作用，其抑制作用与大蒜素的浓度和时间 呈正相关。结论大蒜素对体外培养的BGC823细胞具有明显的增殖抑制作用。【关键词】大蒜素;胃癌;BGC823细胞 大蒜在我国民间药用已有三千多年的历史，在《本草纲目》和《验方新编》 中就有关于大蒜药用价值的记载[1]。大蒜素(又名大蒜注射液)是对大蒜进行重整 获得的挥发油，有效成分为大蒜辣素。大蒜辣素不仅具有抗菌消炎的作用，而且 可以抑制多种癌细胞的生长并诱导其凋亡。胃癌的发生和发展与细胞凋亡关系密 切，诱导细胞凋亡已成为治疗胃癌的新手段。大蒜素作为一种可诱导细胞凋亡的 天然药物，有望为胃癌治疗开辟一条新途径[2]。本研究将对大蒜素抑制胃癌细 胞的生长作用加以探讨论文。
1材料与方法 1.1材料 大蒜素注射液(三硫二丙烯)购自安徽华源医药有限公司，BGC823细胞为 吉林医药学院检验系细胞培养室冻存细胞株。
1.2细胞生长状态观察 常规培养胃癌细胞至对数生长期[3]，将对数生长期细胞均匀的分成7组(每 组设有1个对照孔和5个实验复孔)，以每孔106个细胞接种于96孔细胞培养板中， 分别向7组中加入大蒜素使终浓度分别为5μg/mL、10μg/mL、15μg/mL、20μg/mL、 25μg/mL、30μg/mL、40μg/mL，其中对照孔中只加入相同体积含10%小牛血清的 1640完全培养液，分别于培养24h、48h、72h和96h时在倒置显微镜下观察细胞形 态并照相。
1.3瑞氏染色观察 取对数生长期细胞,同样将细胞均匀分成7组，分别接种于灭菌处理后放有盖玻片的细胞培养皿中,加入大蒜素使终浓度分别为5μg/mL、10μg/mL、15μg/mL、 20μg/mL、25μg/mL、30μg/mL、40μg/mL，培养24h、48h、72h和96h。终止培养 后取出盖玻片，自然干燥，滴加瑞氏染液染色1min，再滴加等量的PBS(磷酸盐 缓冲液)，轻轻晃动玻片，混匀，静置5min;水洗、吸干、镜检观察并照相。
1.4MTT法检测 取对数生长期细胞，以106个/mL细胞接种到96孔板，每孔体积200μL。按 照药物作用浓度设置7个实验组，使大蒜素终浓度为5μg/mL、10μg/mL、15μg/mL、 20μg/mL、25μg/mL、30μg/mL、40μg/mL。每个浓度组分别设置5个实验复孔， 并设置1个调零孔。分别于培养24h、48h、72h加20μLMTT溶液,继续培养4h后加 二甲基亚砜，微量振荡器振荡10min，在490nm酶联免疫检测仪检测,记录OD值， 并求出生长抑制率(IR),IR(%)=(1-用药组平均OD值/对照组平均OD值)×100%,以 时间为横轴，IR为纵轴绘制细胞生长的抑制曲线,并计算出药物的半数抑制浓度 (IC50)[4]。
2结果 2.1大蒜素对BGC823细胞生长状态的影响 倒置显微镜观察经不同浓度大蒜素作用后48h细胞的形态，与对照组对比， 细胞间隙变大，细胞浆中出现颗粒样变化，细胞形态改变，体积变小、变圆，有 的呈悬浮状态，见图1。对照组15mg/L大蒜素组图1BGC823细胞生长状态(40×) 2.2瑞氏染色 瑞氏染色法染色后，经大蒜素作用48h的细胞出现退行性变，细胞体积变 小、变圆，胞质浓染、结构模糊、边缘不清晰、核固缩、深染等特征,见图2。对 照组15mg/L大蒜素组图2BGC823细胞生长状态(40×) 2.3MTT检测 MTT检测结果显示：大蒜素对胃癌细胞具有明显的抑制增殖作用，并且随 着药物浓度的增加和作用时间的延长，抑制作用越强、抑制率越大，并求得药物 半数抑制浓度(IC50)为15mg/L。见图3。图3不同浓度大蒜素对BGC823细胞的抑 制作用 3讨论胃癌是常见的消化道肿瘤，在我国发病率较高，临床上主要采用外科切除、 药物化疗和放射治疗等方法治疗胃癌，手术切除如不彻底,易复发，而药物化疗 和放射治疗手段除了杀伤肿瘤细胞以外，对宿主的免疫系统也造成了伤害，且治 疗效果不甚理想。而大蒜作为日常生活中常见的食物，不仅仅价格低廉，而且其 主要成分大蒜素，含有一些特殊的具有生物活性的物质，如含硫化合物(蒜氨酸、 蒜油、蒜素、阿霍烯等)、微量元素(高含量的锗、硒、磷、镁等)、超氧化物歧化 酶(SOD)等，使大蒜具有广泛的药效，尤其具有良好的抗菌消炎和抗肿瘤的作用 [5]，先前已有资料证明大蒜素对肝、胃、结肠、宫颈、乳房等多种肿瘤均有抗 癌活性,作用广泛[6]。
本实验观察到胃癌细胞经不同浓度的大蒜素作用后，细胞形态发生明显的 改变，与对照组的细胞相比可见细胞体积明显变小、变圆，胞浆中出现明显颗粒 样和空泡样改变，有的甚至悬浮，说明不同浓度的大蒜素对胃癌细胞都具有杀伤 作用[7]。另外，通过细胞生长曲线的绘制、MTT检测，进一步证明了大蒜素对 胃癌细胞的生长具有明显的抑制作用，并且随着大蒜素浓度的梯度增加和作用时 间的延长，其抑制作用也随之增大。生长曲线是观测细胞在一代生存期内增生过 程的重要指标，MTT比色实验是一种检测细胞存活和生长的方法,通过这些实验 方法都能进一步证明不同浓度大蒜素对胃癌细胞增殖具有抑制作用，为进一步研 究大蒜素抑制胃癌细胞生长机制奠定基础。
本实验证明了大蒜素对胃癌细胞BGC823增殖具有抑制作用，随着免疫组 化技术、分子生物学等技术的发展，对各种药物的药理作用机制研究已经广泛而 深入，所以应进一步明确大蒜素中各种成分的药理作用，并且进一步探讨大蒜素 抑制胃癌细胞生长机制，从而开发出新的抗癌药物，对肿瘤的治疗产生深刻的影 响。