【摘要】 目的 优选痛清颗粒中芍药苷与葛根素的提取工艺。方法 采用4因素3水平的正交试验设计法,以芍药苷、葛根素转移率综合评分为考核指标,筛选影响提取工艺的因素。结果 实验设计三因素没有显著性影响。结合生产实际需要,痛清颗粒中芍药苷与葛根素的最佳提取条件是：加入22倍量水提取3次(12,5,5),提取2 h (1.0,0.5,0.5)。结论 此条件为痛清颗粒中芍药苷和葛根素的最佳提取工艺。
【关键词】 痛清颗粒；芍药苷；葛根素；正交试验；提取工艺
Abstract：Objective To optimize the technology of extracting Paeoniflorin and Puerarin from Tongqing Granules. Methods The experiment used the orthogonal experimental design (4 factors and 3 levels) with the shift-rate of Paeoniflorin and Puerarin as experimental criterion in screening the factors affecting the technology of extracting Tongqing Granules. Results All the 3 factors designed in the orthogonal experiment non-signifantly affected the extracting technology. In consideration of the industrial practice, the best condition of extracting the constituents from Tongqing Granules was decided：water extraction for 3 times, extracting with 12 fold water for 1 hours for the first time, with 5 fold water for 0.5 hours for the second time, and with 5 fold water for 0.5 hour for the third time. Conclusion The condition is the optimized technology of extracting Paeoniflorin and Puerarin from Tongqing Granules.
Key words：Paeoniflorin；Puerarin；orthogonal experiment；extracting technology
痛清颗粒是由白芍、葛根等中药精制而成的中药复方制剂,临床用于治疗头痛。白芍是毛茛科植物芍药(Paeonia lactiflora Pall.)的干燥根,性微寒,味苦、酸,具有养血柔肝、缓中止痛、敛阴收汗之功效[1]。葛根是豆科植物野葛Pueraria lobata (Willd.)Ohwi的干燥根,性凉,味甘、辛,具有解肌退热、生津、透疹、升阳止泻的功效[1]。本试验对其提取工艺进行了研究,以芍药苷、葛根素转移率为考核指标,采用综合评分的方法获得了最佳提取工艺。现报道如下。
1 仪器与试药
Waters高效液相色谱仪(美国)；16G-型高速离心机；SB5200 型超声清洗机(上海Branson公司)；AEL-40SM型电子天平(日本岛津)。甲醇、乙腈为色谱纯,乙醇为分析纯,水为重蒸水。白芍、葛根等药材经鉴定,符合2005版《中华人民共和国药典》标准。芍药苷、葛根素对照品购自中国药品生物制品检定所,批号110736-200525、110752-200209。
2 方法与结果
2.1 正交设计
在查阅大量文献以及预实验的基础上,发现用水作为提取溶剂时均能较好提取芍药苷、葛根素等。我们选用L9(34)正交表,对加水量(A)、提取时间(B)、提取次数(C)三因素进行了考察,以芍药苷、葛根素转移率为考察指标,综合评分,优选最佳提取工艺。因素水平见表1。 表1 正交试验因素水平表（略）
2.2 含量测定
2.2.1 芍药苷
色谱条件：Lichrospher C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),Waters 515高效液相色谱仪；2487双波长紫外检测器；检测波长λ=230 nm；流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液(14∶86)；流速为1.0 mL/min；0.5 AUFS；柱温30 ℃；进样量为5 μL。分别配制不同浓度的芍药苷对照品溶液,在上述色谱条件下进行测定,以芍药苷进样量(X)对峰面积(Y)进行线性拟合,回归方程为：Y=6 486 000X+32 616.756,r=0.999 7,结果在0.093～2.97 μg范围内线性关系良好。
2.2.2 葛根素
色谱条件：Lichrospher C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),Waters 515高效液相色谱仪；2487双波长紫外检测器；检测波长λ=250 nm；流动相为甲醇-水(25∶75)；流速为1.0 mL/min；0.5 AUFS；柱温30 ℃；进样量为5 μL。分别配制不同浓度的葛根素对照品溶液,在上述色谱条件下进行测定,以葛根素进样量(X)对峰面积(Y)进行线性拟合,回归方程为：Y=22 670 000X+15 521.725,r=0.999 9,结果在0.10～41.1 μg范围内线性关系良好。
2.3 水提样品处理与测定
取水提正交设计所得样品,分别用测定芍药苷和葛根素的流动相稀释不同的倍数,充分振摇,高速离心处理,上清液用0.2 μm的微孔滤膜过滤,所得样品分别在上述测定芍药苷和葛根素的色谱条件下进行测定。
2.4 数据分析及实验结果
对正交试验测定的数据进行极差和方差分析,结果见表2、表3。表2 痛清颗粒的正交试验数据极差分析表（略）注：综合评分(%)=芍药苷转移率×50%+葛根素转移率×50%。表3 痛清颗粒的正交试验数据方差分析表（略）注：F(2,2)0.05=19.0。
从表2极差分析结果可知,因素影响C>B>A,但3因素3个水平之间均无显著性差异(由表3可知)。由极差分析得出的最佳工艺组合是A3B1C3,即加水量为药材用量26倍,提取3次,第1次1.0 h,第2、3次每次各0.5 h,3次的加水量分别为14、6和6。而表2中最佳的实验组合是A2B2C3,芍药苷和葛根素的转移率均在90%以上,即加水量为22倍量,提取3次,分别提取1.5、1.0、0.5 h。对A3B1C3和A2B2C3进行重复实验,结果表明,两种有效成分的转移率均在85%以上,考虑到生产实际,选择最佳的提取工艺条件是A2B1C3。
3 小结
提取时间是影响中成药生产中中药药效成分浸出的一个重要因素,一般认为长时间加热会破坏有效成分。本实验发现,多次短时间连续提取对芍药苷、葛根素的浸出有利,时间延长导致转移率下降。证明芍药苷与葛根素受热不稳定,易发生水解等化学反应,不宜长时间加热。
【参考文献】
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].北京：化学工业出版社, 2005.68,273.
[2] 张晓燕,王金辉,李 铣.白芍的化学成分研究[J].沈阳药科大学学报, 2001,18(1)：30.